上海欧玛仕生物胰酶-EDTA消化液(0.05% 胰酶,不含酚红)作用原理

上海欧玛仕生物胰酶-EDTA消化液(0.05% 胰酶,不含酚红)作用原理介绍，定位：细胞培养用低浓度温和消化液，用于敏感/半贴壁细胞传代、无酚红干扰实验。

核心成分（1×,无菌）

胰蛋白酶：0.05%（w/v）——温和水解细胞间粘附蛋白。

EDTA·2Na：0.02%（w/v）——螯合 Ca²⁺/Mg²⁺，辅助解离。

溶剂：无钙镁 PBS 或 Hanks 液，pH 7.2–7.8。

不含：酚红、血清、抗生素——避免干扰荧光/流式/药物筛选。

作用原理

胰酶：切割赖氨酸/精氨酸C端肽键，破坏纤连蛋白、钙粘蛋白等粘附分子。

EDTA：去除二价阳离子，削弱钙粘蛋白功能，增强消化、缩短时间。

无酚红：消pH指示剂对荧光成像、流式细胞术、凋亡检测的干扰。

适用场景

敏感细胞：如原代细胞、干细胞、免疫细胞（避免0.25%胰酶损伤）。

半贴壁细胞：如HEK293、CHO、某些肿瘤细胞。

无酚红实验：荧光染色、流式、Annexin-V凋亡、钙信号检测。

常规传代：需温和消化、减少细胞应激的日常培养。

使用方法（贴壁细胞）

吸弃旧培养基，用无菌PBS洗细胞1次（去除血清残留）。

加入适量消化液（覆盖细胞层，如6孔板每孔 0.5–1 mL）。

37℃孵育 1–3 min（显微镜下观察：细胞变圆、开始脱落即可）。

立即加入含血清完全培养基（血清终止胰酶活性），轻轻吹打为单细胞悬液。

离心（1000 rpm，5 min），弃上清，重悬接种。

储存与稳定性

保存：-20℃避光，有效期12个月；4℃可存1个月，避免反复冻融。

运输：干冰（-20℃）或冰袋（4℃）。

注意事项

胰酶活性受温度、pH影响，37℃、pH 7.6–8.0 活性最高。

血清会抑制胰酶，消化前务必洗净残留培养基。

含EDTA，不可用于需Ca²⁺的实验（如Annexin-V凋亡检测，需用无EDTA胰酶）。

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