上海欧玛仕生物无菌食蟹猴血清实验核心原理介绍

上海欧玛仕生物无菌食蟹猴血清实验，核心是利用抗原 - 抗体特异性结合或酶促 / 理化反应，在无菌条件下检测食蟹猴血清中目标物质（抗体、抗原、细胞因子、激素、药物等）的含量、活性或功能，为药物研发、毒理、免疫评价提供数据。

一、核心通用原理（血清学实验基础）

所有基于血清的免疫检测，均基于抗原 - 抗体特异性结合：

抗原（Ag）：待检物质（如药物、病毒、蛋白）或免疫原。

抗体（Ab）：食蟹猴体内产生的特异性免疫球蛋白，或实验用标记抗体。

结合后形成Ag - Ab 复合物，通过显色、荧光、发光、浊度等信号放大，实现定性 / 定量 / 半定量检测。

二、主流实验类型与原理（无菌食蟹猴血清常用）

1. ELISA（酶联免疫吸附试验，最常用）

核心原理：双抗体夹心法 / 间接法 / 竞争法，用酶标记抗体 / 抗原催化底物显色，OD 值与待测物浓度正相关。

无菌食蟹猴血清应用：

检测药物浓度（药代动力学 PK）。

检测抗药抗体 ADA（免疫原性评价）。

检测细胞因子、激素、生长因子（如 FGF - 21、皮质醇、胰高血糖素）。

典型流程（夹心法）：

包被捕获抗体于微孔板（无菌操作）。

加入无菌食蟹猴血清样本，孵育，目标 Ag 与捕获 Ab 结合。

加入酶标检测抗体，形成 “捕获 Ab - Ag - 酶标 Ab” 复合物。

洗涤去除未结合物，加底物 TMB，酶催化显色（蓝→黄）。

酶标仪测450nm OD 值，对照标准曲线计算浓度。

2. 中和试验（如 RFFIT、病毒中和）

核心原理：血清中中和抗体可阻断病毒 / 毒素对细胞的感染 / 毒性，通过细胞病变（CPE）或荧光灶减少判断抗体效价。

无菌食蟹猴血清应用：疫苗免疫原性评价（如狂犬病、新冠疫苗）。

典型流程（RFFIT 测狂犬病中和抗体）：

无菌稀释食蟹猴血清，与固定量狂犬病病毒孵育。

加入易感细胞（如 BHK - 21），共培养。

荧光染色，计数荧光灶数。

血清抗体效价越高，荧光灶越少；≥0.5 IU/mL 判为阳性。

3. 补体依赖实验（CDC，补体依赖性细胞毒性）

核心原理：血清中补体系统被抗原 - 抗体复合物激活，形成膜攻击复合物（MAC），裂解靶细胞；细胞死亡率与抗体滴度 / 补体活性正相关。

无菌食蟹猴血清应用：抗体药物体外功能评价（如抗肿瘤单抗）。

流程要点：

靶细胞 + 待测抗体 + 无菌食蟹猴补体血清。

孵育，补体激活→细胞裂解。

检测LDH 释放 / 活细胞数，计算 CDC 活性。

4. 生化 / 理化检测（如 LC - MS/MS、酶活性）

核心原理：不依赖免疫反应，通过色谱分离、质谱检测、酶促反应直接定量血清中小分子（激素、药物、代谢物）或酶活性。

无菌食蟹猴血清应用：

LC - MS/MS：测皮质醇、甲状腺激素、药物浓度。

酶活性检测：凝血因子、转氨酶、激酶活性。

LC - MS/MS 示例（皮质醇）：

无菌血清样本前处理（蛋白沉淀、萃取）。

液相色谱分离皮质醇与内标。

质谱（APCI+）检测离子对（皮质醇 m/z 363.2→327.4）。

峰面积比定量，线性范围 62.4–2000.0 mg/L。

5. 免疫原性检测（ADA/NAb）

核心原理：检测食蟹猴体内抗药抗体（ADA）或中和抗体（NAb），评价药物免疫风险。

方法：

ADA：ELISA/ECL（电化学发光），桥接法富集 ADA，标记抗原检测。

NAb：细胞法，检测 ADA 是否阻断药物生物学功能。

三、“无菌” 的关键意义与操作要点

为什么要无菌：

避免微生物污染导致血清中补体、酶、细胞因子失活或降解。

防止内毒素干扰细胞实验（如 CDC、中和试验）。

保证实验结果准确性、重复性，符合 GLP 规范。

无菌操作要点：

血清采集、分离、储存全程无菌（无热原、无内毒素试管）。

实验用试剂、耗材高压灭菌 / 过滤除菌。

超净台 / 生物安全柜内操作，避免交叉污染。

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