上海欧玛仕生物胰酶-EDTA消化液(0.05%胰酶，不含酚红)核心原理与成分

上海欧玛仕生物胰酶-EDTA消化液(0.05%胰酶，不含酚红)核心原理与成分
一、核心原理与成分

1. 作用原理（协同机制）

胰酶（0.05%）：丝氨酸蛋白酶，特异性水解赖氨酸 / 精氨酸 C 端肽键，切断细胞间、细胞 - 基质间的粘附蛋白（纤连蛋白、层粘连蛋白、钙粘蛋白），使细胞离散。

EDTA（0.02%）：二价阳离子螯合剂，结合Ca²⁺/Mg²⁺，破坏钙粘蛋白等粘附分子的结构与功能，进一步削弱细胞粘附，提升消化效率。

不含酚红：无 pH 指示剂，避免酚红对部分实验（如荧光检测、流式、某些药物筛选）的干扰。

2. 典型配方（无菌过滤）

胰蛋白酶（Trypsin）：0.05%（w/v）

EDTA·2Na：0.02%（w/v）

溶剂：无钙镁 PBS/Hanks 液，pH 7.2–7.8

无菌、无血清、无抗生素

二、标准实验操作流程（贴壁细胞传代）

1. 实验前准备

试剂：0.05% 胰酶 - EDTA（不含酚红）、无菌 PBS、含血清完全培养基、离心管、移液器、细胞计数板 / 台盼蓝、显微镜

条件：37℃培养箱、超净台、离心机（1000–1500 g）

细胞状态：汇合度70%–80%、无明显污染、状态良好

2. 操作步骤（以 T25 培养瓶为例）

弃液与洗涤

吸净旧培养液，加入5 mL 无菌 PBS，轻轻晃动洗涤细胞 1 次，吸弃 PBS（去除残留血清，避免抑制胰酶）。

加入消化液

加入1–2 mL 0.05% 胰酶 - EDTA，确保完全覆盖细胞层；室温 / 37℃孵育30 s–2 min（不同细胞差异大，需镜下监控）。

消化监控（关键）

显微镜观察：细胞收缩变圆、间隙增大，轻敲培养瓶壁细胞可脱落；或枪头轻吹即散，立即终止消化。

不含酚红，无法通过颜色判断 pH，必须镜检。

终止消化

加入2–3 倍体积含血清完全培养基（血清中蛋白酶抑制剂中和胰酶），轻柔吹打瓶底，使细胞完全脱落成单细胞悬液。

离心与重悬

细胞悬液转入离心管，1000–1500 g 离心 3–5 min，弃上清；加入适量完全培养基重悬细胞沉淀。

计数与接种 / 实验

台盼蓝染色计数活率（应> 90%）；按实验需求接种新培养瓶/板，或用于后续实验（如流式、蛋白提取、药物处理）。

三、关键注意事项（避免细胞损伤 / 实验失败）

严格控制消化时间

0.05% 胰酶温和但仍需精准：过度消化会损伤细胞膜、受体与表面蛋白，导致细胞活力下降、贴壁差；消化不足则细胞成团、传代不均。

敏感细胞（如内皮、原代细胞）：室温消化，30 s–1 min即终止。

血清必须彻底洗涤

血清含胰酶抑制剂，残留会显著降低消化效率、延长时间，易导致消化不均。

不含酚红的操作要点

全程显微镜监控，不依赖颜色判断；消化液 pH 稳定在 7.2–7.8，避免酸碱波动影响酶活。

温度与酶活

37℃活性最高，室温消化时间需适当延长；消化液4℃短期保存，长期 - 20℃分装冻存，避免反复冻融。

适用与不适用场景

适用：半贴壁细胞、对胰酶敏感细胞、需避免酚红干扰的实验（荧光、流式、某些生化检测）。

不适用：需 Ca²⁺参与的实验（如 Annexin V 凋亡检测），EDTA 会螯合钙离子影响结果。

无菌操作

消化液无抑菌剂，全程超净台操作，防止污染。

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