上海欧玛仕生物0.25%胰酶-EDTA消化液(不含酚红)产品核心成分与原理

上海欧玛仕生物0.25%胰酶-EDTA消化液(不含酚红)是细胞培养中最常用的贴壁细胞解离试剂，用于将贴壁细胞从培养瓶 / 板上消化下来，制成单细胞悬液，供传代、冻存或后续实验使用。

一、产品核心成分与原理

成分：

0.25%胰蛋白酶（Trypsin）：丝氨酸蛋白酶，特异性水解赖氨酸 / 精氨酸羧基端肽键。

0.02% EDTA（乙二胺四乙酸）：螯合 Ca²⁺、Mg²⁺，破坏钙依赖性细胞连接（如钙黏蛋白、整合素）。

不含酚红：避免对荧光检测、流式、免疫染色等实验产生干扰。

溶剂：无钙镁 PBS/Hanks 液（维持渗透压、pH 7.2–7.6）。

作用机制

胰酶：水解细胞外基质（纤连蛋白、层粘连蛋白）与细胞间连接蛋白。

EDTA：去除 Ca²⁺/Mg²⁺，削弱细胞黏附，加速脱落。

结果：细胞由伸展状态收缩变圆、间隙增大、成片脱落。

二、标准实验操作（贴壁细胞传代）

1. 准备（无菌操作）

预热：消化液、PBS、完全培养基至 37℃。

吸弃旧培养基，用无钙镁 PBS洗涤细胞 1–2 次（去除血清，血清含胰酶抑制剂）。

2. 消化（关键步骤）

加消化液：覆盖细胞层即可（T25 约 1 mL）。

孵育：37℃，1–3 分钟（显微镜下观察）。

判定终点：

细胞收缩变圆、间隙增大

轻拍瓶壁：80% 细胞呈流沙状脱落

立即终止，避免过度消化

3. 终止与收集

终止：加入≥3 倍体积含血清培养基（血清抑制胰酶）。

吹打：轻柔吹打细胞层，制成单细胞悬液。

离心：1200 rpm × 5 min，弃上清。

重悬：用新鲜培养基重悬细胞，分瓶传代。

三、关键注意事项

消化时间：宁短勿长。过度消化会导致细胞损伤、贴壁差、存活率下降。

血清抑制：必须用 PBS 洗去血清，否则消化效率大幅下降。

温度：37℃ 活性最高；4℃抑制。

储存：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤3 次）。

不含酚红：适合流式、免疫荧光、细胞凋亡、活细胞成像等实验。

四、常见问题与解决

消化不足：吸去终止液，重新加胰酶消化 1–2 分钟。

消化过度：立即终止、离心、更换新鲜培养基。

细胞成团：轻柔吹打、避免剧烈震荡。

难消化细胞：延长消化时间、增加 EDTA 浓度或改用胰酶 - 胶原酶。

五、适用场景

贴壁细胞传代（如 HEK293、HeLa、HepG2、MCF-7 等）

原代细胞分离（联合胶原酶）

细胞冻存（制备单细胞悬液）

流式细胞术、免疫荧光、凋亡检测（不含酚红更适合）

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