细胞培养基操作注意事项：欧玛仕生物为您来详细讲解！

欧玛仕生物为您来详细讲解细胞培养基操作注意事项如下：

一、解冻与复苏

冷冻储存的培养基（含血清或无血清）需采用梯度解冻法：先置于 2-8℃冰箱过夜解冻，避免直接室温或 37℃水浴快速解冻，防止营养成分（如蛋白质、生长因子）变性失活。

解冻过程中需定期轻轻颠倒混匀，确保培养基成分均匀溶解，避免局部浓度不均；严禁剧烈摇晃，防止产生过多气泡影响细胞生长。

解冻后的培养基若出现少量沉淀（血清中脂蛋白析出属正常现象），可在 37℃水浴中温和振荡溶解，若沉淀无法溶解或出现浑浊、异味，需立即丢弃，不可使用。

避免培养基反复冻融（建议不超过 2 次），解冻后短期内（1 周内）使用可储存于 2-8℃，长期使用需分装为单次用量（如 50mL / 瓶）后于 - 20℃/-80℃冷冻保存，分装时需遵循无菌操作。

二、配制与补充剂添加

配制培养基前需提前将试剂（干粉培养基、血清、抗生素、生长因子等）平衡至室温，避免因温度差异导致冷凝水影响无菌环境。

干粉培养基溶解时，先加入适量无菌去离子水（或超纯水），轻轻搅拌至完全溶解（避免剧烈搅拌产生泡沫），再按说明书要求补加剩余水量，不可直接用完全水量溶解（易导致局部浓度过高）。

严格按照产品说明书添加血清（如胎牛血清 FBS 终浓度通常为 10%-20%）、抗生素（如青霉素 - 链霉素终浓度 100U/mL）、生长因子（如 EGF、bFGF）等补充剂，添加顺序建议：基础培养基→血清→抗生素→其他添加剂，每步添加后轻轻混匀。

调节培养基 pH 值：大多数细胞适宜 pH 为 7.2-7.4，使用无菌 NaOH 或 HCl 溶液缓慢调节，边加边搅拌，避免 pH 值剧烈波动；调节后可静置 10-15 分钟，待 pH 稳定后再使用。

若培养基需添加碳酸氢钠（NaHCO₃）等缓冲剂，需单独溶解后缓慢加入，避免与其他成分直接混合产生沉淀；所有补充剂需确保无菌，建议使用 0.22μm 滤膜过滤除菌后添加（血清除外，合格血清已无菌处理）。

三、灭菌与过滤

含热敏感成分（血清、生长因子、抗生素）的完全培养基需采用过滤灭菌法：使用 0.22μm 孔径的无菌滤膜（聚醚砜 PES 或硝酸纤维素 NC 材质）过滤，过滤时避免压力过大，防止滤膜破损导致污染。

无血清基础培养基（不含热敏感成分）可采用高压蒸汽灭菌（121℃、15psi、20 分钟），灭菌后需冷却至室温再添加补充剂，避免高温破坏添加成分。

过滤灭菌前需检查滤膜完整性，过滤后可取样进行无菌检验（如接种于无菌培养基中 37℃培养 24-48 小时，观察是否有菌生长）；过滤后的培养基需立即密封，标注配制日期、成分及有效期。
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